20.E: Análise Laboratorial da Resposta Imune (Exercícios)

20.1: Aplicações práticas de anticorpos monoclonais e policlonais

Além de serem cruciais para nossa resposta imune normal, os anticorpos fornecem ferramentas poderosas para fins de pesquisa e diagnóstico. A alta especificidade dos anticorpos os torna uma excelente ferramenta para detectar e quantificar uma ampla gama de alvos, de medicamentos a proteínas séricas e microrganismos. Com ensaios in vitro, os anticorpos podem ser usados para precipitar antígenos solúveis, aglutinar células e neutralizar drogas, toxinas e vírus.

Escolha múltipla

Para muitos usos em laboratório, os anticorpos policlonais funcionam bem, mas para alguns tipos de ensaios, eles carecem de ________ suficientes porque reagem de forma cruzada com antígenos inadequados.

1. especificidade
2. sensibilidade
3. precisão
4. reatividade

Resposta

UMA

Como os anticorpos monoclonais são produzidos?

1. Células B produtoras de anticorpos de um camundongo são fundidas com células de mieloma e, em seguida, as células são cultivadas em cultura de tecidos.
2. Um camundongo é injetado com um antígeno e, em seguida, os anticorpos são retirados do soro.
3. Eles são produzidos pelo sistema imunológico humano como uma resposta natural a uma infecção.
4. Eles são produzidos pelo sistema imunológico de um camundongo como uma resposta natural a uma infecção.

Resposta

UMA

Preencha o espaço em branco

Quando injetamos o mesmo antígeno em um animal pela segunda vez, algumas semanas após o primeiro, ________ ocorre, o que significa que os anticorpos produzidos após a segunda injeção, em média, se ligam ao antígeno com mais força.

Resposta

maturação por afinidade

Ao usar mAbs para tratar doenças em humanos, os mAbs devem primeiro ser ________, substituindo o DNA da região constante do mouse pelo DNA da região constante humana.

Resposta

humanizado

Se usássemos mAbs normais de camundongo para tratar doenças humanas, doses múltiplas fariam com que o paciente respondesse com ________ contra os anticorpos de camundongos.

Resposta

anticorpos neutralizantes

Uma resposta policlonal a uma infecção ocorre porque a maioria dos antígenos tem vários ________,

Resposta

epítopos

Resposta curta

Descreva duas razões pelas quais os anticorpos policlonais têm maior probabilidade de apresentar reatividade cruzada do que os anticorpos monoclonais.

Pensamento crítico

Suponha que você estivesse examinando produtos em uma mercearia quanto à presença de contaminação por E. coli. Seria melhor usar um antissoro policlonal anti-E. coli ou um mAb contra uma proteína de membrana de E. coli? Explique.

20.2: Detecção de complexos antígeno-anticorpo in vitro

Os testes laboratoriais para detectar anticorpos e antígenos fora do corpo (por exemplo, em um tubo de ensaio) são chamados de ensaios in vitro. Quando os anticorpos e seus antígenos correspondentes estão presentes em uma solução, muitas vezes podemos observar uma reação de precipitação na qual grandes complexos (redes) se formam e se depositam na solução.

Escolha múltipla

A formação de ________ é um resultado positivo no teste VDRL.

1. floculante
2. precipitação
3. coagulação
4. uma cor rosa brilhante

Resposta

UMA

O título de um teste de neutralização do vírus é a maior diluição do soro do paciente

1. em que não há DNA viral detectável.
2. em que não há proteína viral detectável.
3. que bloqueia completamente a formação da placa.
4. que reduz a formação de placa em pelo menos 50%.

Resposta

D

No ensaio de Ouchterlony, vemos uma forma nítida de arco de precipitina entre antígeno e antissoro. Por que esse arco permanece visível por muito tempo?

1. As moléculas de anticorpos são muito grandes para serem difundidas pelo ágar.
2. A rede de precipitina é muito grande para se difundir pelo ágar.
3. O metanol, adicionado quando o arco se forma, desnatura a proteína e bloqueia a difusão.
4. As moléculas do antígeno são quimicamente acopladas à matriz do gel.

Resposta

B

Preencha o espaço em branco

Ao adicionar lentamente antígeno a um antissoro, a quantidade de precipitina aumentaria gradualmente até atingir o ________; a adição de mais antígeno após esse ponto realmente diminuiria a quantidade de precipitina.

Resposta

zona de equivalência ou zona de equivalência

O teste de imunodifusão radial quantifica o antígeno misturando ________ em um gel e, em seguida, permitindo que o antígeno se difunda para fora de um poço cortado no gel.

Resposta

antisérum

Resposta curta

Explique por que a hemólise no teste de fixação do complemento é um teste negativo para infecção.

O que significa o termo “anticorpos neutralizantes” e como podemos quantificar esse efeito usando o ensaio de neutralização viral?

Pensamento crítico

Tanto os anticorpos IgM quanto os IgG podem ser usados em reações de precipitação. No entanto, uma dessas classes de imunoglobulinas formará precipitados em concentrações muito mais baixas do que a outra. Que classe é essa e por que ela é muito mais eficiente nesse aspecto?

20.3: Ensaios de aglutinação

Além de causar precipitação de moléculas solúveis e floculação de moléculas em suspensão, os anticorpos também podem agrupar células ou partículas (por exemplo, esferas de látex revestidas com antígeno) em um processo chamado aglutinação. A aglutinação pode ser usada como um indicador da presença de anticorpos contra bactérias ou glóbulos vermelhos. Os ensaios de aglutinação geralmente são rápidos e fáceis de realizar em uma lâmina de vidro ou placa de microtitulação.

Escolha múltipla

Usamos antissoros para distinguir entre vários ________ dentro de uma espécie de bactéria.

1. isótipos
2. sorovares
3. subespécies
4. linhas

Resposta

B

Ao usar antissoros para caracterizar bactérias, geralmente vinculamos os anticorpos a ________ para melhor visualizar a aglutinação.

1. miçangas de látex
2. glóbulos vermelhos
3. outras bactérias
4. glóbulos brancos

Resposta

UMA

O teste de triagem de anticorpos que é feito junto com a tipagem sanguínea pré-transfusão é usado para garantir que o receptor

1. não tem uma infecção bacteriana ou viral não detectada anteriormente.
2. não é imunocomprometido.
3. na verdade, tem o tipo sanguíneo indicado no gráfico online.
4. não está produzindo anticorpos contra antígenos fora dos sistemas ABO ou Rh.

Resposta

D

O teste direto de Coombs foi desenvolvido para detectar quando as pessoas têm uma doença que as causa

1. tem uma febre excessivamente alta.
2. pare de produzir anticorpos.
3. produz muitos glóbulos vermelhos.
4. produzem anticorpos que se ligam aos seus próprios glóbulos vermelhos.

Resposta

D

Os ensaios de hemaglutinação viral só funcionam com certos tipos de vírus porque

1. o vírus deve ser capaz de reticular diretamente os glóbulos vermelhos.
2. o vírus deve ser capaz de lisar os glóbulos vermelhos.
3. o vírus não deve ser capaz de lisar os glóbulos vermelhos.
4. é muito perigoso trabalhar com outros vírus em um ambiente de laboratório clínico.

Resposta

UMA

Preencha o espaço em branco

No cruzamento principal, misturamos ________ com os glóbulos vermelhos do doador e procuramos a aglutinação.

Resposta

soro do paciente

O reagente de Coombs é um antissoro com anticorpos que se ligam ao ________ humano.

Resposta

imunoglobulinas/anticorpos e/ou complemento

Resposta curta

Explique por que o título de um ensaio de hemaglutinação direta é a maior diluição que ainda causa hemaglutinação, enquanto no ensaio de inibição da hemaglutinação viral, o título é a maior diluição na qual a hemaglutinação não é observada.

Por que um médico pediria um teste direto de Coombs quando um bebê nasce com icterícia?

Pensamento crítico

Quando ocorre escassez de sangue doado, sangue O negativo pode ser administrado aos pacientes, mesmo que eles tenham um tipo sanguíneo diferente. Por que esse é o caso? Se o suprimento de sangue O-negativo fosse esgotado, qual seria a próxima melhor opção para um paciente com um tipo sanguíneo diferente e com necessidade crítica de uma transfusão? Explique suas respostas.

20.4: Imunoensaios enzimáticos (EIA) e ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA)

Os imunoensaios enzimáticos (EIA) são usados para visualizar e quantificar antígenos. Eles usam um anticorpo conjugado a uma enzima para se ligar ao antígeno, e a enzima converte um substrato em um produto final observável. O substrato pode ser um cromógeno ou um fluorogênio. A imunomarcação é uma técnica de EIA para visualizar células em um tecido (imunohistoquímica) ou examinar estruturas intracelulares (imunocitoquímica). O ELISA direto é usado para quantificar um antígeno em solução.

Escolha múltipla

Em um imunoensaio enzimático, a enzima

1. está ligado pelo local de ligação ao antígeno do anticorpo.
2. está preso ao poço de uma placa de microtitulação.
3. é conjugado com o antígeno suspeito.
4. está ligado à região constante do anticorpo secundário.

Resposta

D

Ao usar uma EIA para estudar microtúbulos ou outras estruturas dentro de uma célula, primeiro fixamos quimicamente a célula e depois tratamos as células com álcool. Qual é o propósito desse tratamento com álcool?

1. Ele faz orifícios na membrana celular grandes o suficiente para a passagem de anticorpos.
2. Isso torna a membrana pegajosa para que os anticorpos se liguem e sejam absorvidos pela endocitose mediada por receptores.
3. Ele remove as cargas negativas da membrana, que de outra forma repeliriam os anticorpos.
4. Evita a ligação inespecífica dos anticorpos à membrana celular.

Resposta

UMA

Em um teste de gravidez de fluxo lateral, você vê uma faixa azul se formando na linha de controle e nenhuma forma de faixa na linha de teste. Este é provavelmente um teste ________ para gravidez.

1. positivo
2. falso-positivo
3. falso-negativo
4. negativo

Resposta

D

Ao realizar um FEIA, o fluorogênio substitui o ________ usado em um EIA.

1. antígeno
2. substrato cromogênico
3. enzima
4. anticorpo secundário

Resposta

B

Preencha o espaço em branco

Para detectar anticorpos contra bactérias na corrente sanguínea usando um EIA, executaríamos um (n) ________, que começaríamos conectando o antígeno da bactéria aos poços de uma placa de microtitulação.

Resposta

ELISA indireto

Resposta curta

Por que é importante em um sanduíche ELISA que o antígeno tenha vários epítopos? E por que pode ser vantajoso usar antissoros policlonais em vez de mAb neste ensaio?

A tira de teste de gravidez detecta a presença de gonadotrofina coriônica humana na urina. Esse hormônio é produzido inicialmente pelo feto e depois pela placenta. Por que a tira de teste é preferida para este teste em vez de usar um ELISA direto ou indireto com seus resultados mais quantificáveis?

Pensamento crítico

Rotule os anticorpos primários e secundários e discuta por que a produção do produto final será proporcional à quantidade de antígeno.

20.5: Técnicas de autoanticorpos fluorescentes

A visualização rápida de bactérias de uma amostra clínica, como um esfregaço na garganta ou escarro, pode ser obtida por meio de técnicas de anticorpos fluorescentes (FA) que ligam um marcador fluorescente (fluorogênio) à região constante de um anticorpo, resultando em uma molécula repórter que é rápida de usar, fácil de ver ou medir, e capaz de se ligar a marcadores-alvo com alta especificidade. Também podemos rotular as células, o que nos permite quantificar com precisão determinados subconjuntos de células ou até mesmo purificá-las para pesquisas futuras.

Escolha múltipla

Suponha que você precise quantificar o nível de células T CD8 no sangue de um paciente se recuperando da gripe. Você trata uma amostra dos glóbulos brancos do paciente usando um mAb fluorescente contra CD8, passa as células por um citômetro de fluxo e produz o histograma mostrado abaixo. A área abaixo do pico à esquerda (azul) é três vezes maior do que a área do pico à direita (vermelho). O que você pode determinar a partir desses dados?

1. Não há células CD8 detectáveis.
2. Há três vezes mais células CD4 do que células CD8.
3. Há três vezes mais células CD8 do que células CD4.
4. As células CD8 representam cerca de um quarto do número total de células.

Resposta

D

Nos dados descritos na pergunta anterior, a intensidade média de fluorescência das células no segundo pico (vermelho) é cerca de ________ do primeiro pico (azul).

1. três vezes
2. 100 vezes
3. um terço
4. 1000 vezes

Resposta

B

Em um teste direto de anticorpos fluorescentes, qual das seguintes opções provavelmente procuraríamos usando um mAb marcado com fluorescência?

1. bactérias em uma amostra de paciente
2. bactérias isoladas de um paciente e cultivadas em placas de ágar
3. antisérum de um paciente espalhado em uma lâmina de vidro
4. antisérum de um paciente que se ligou a esferas revestidas com antígeno

Resposta

UMA

Preencha o espaço em branco

Na citometria de fluxo, os subconjuntos celulares são marcados usando um anticorpo fluorescente contra uma proteína de membrana. O fluorogênio é ativado por a (n) ________ à medida que as células passam pelos detectores.

Resposta

laser

A fluorescência em um citômetro de fluxo é medida por um detector colocado em ângulo com a fonte de luz. Há também um detector em linha que pode detectar aglomerados celulares ou ________.

Resposta

fragmentos

Pensamento crítico

Um paciente suspeito de ter sífilis é testado usando o teste VDRL e o IFA. O teste IFA dá positivo, mas o teste VDRL é negativo. Qual é a razão mais provável para esses resultados?

Um médico suspeita que um paciente com pneumonia possa estar infectado por Legionella pneumophila. Descreva brevemente duas razões pelas quais um teste de DFA pode ser melhor para detectar esse patógeno do que as técnicas bacteriológicas padrão.