20.E : Analyse en laboratoire de la réponse immunitaire (exercices)

20.1 : Applications pratiques des anticorps monoclonaux et polyclonaux

En plus d'être essentiels à notre réponse immunitaire normale, les anticorps constituent de puissants outils de recherche et de diagnostic. La haute spécificité des anticorps en fait un excellent outil pour détecter et quantifier un large éventail de cibles, des médicaments aux protéines sériques en passant par les microorganismes. Les tests in vitro permettent d'utiliser des anticorps pour précipiter des antigènes solubles, agglutiner les cellules et neutraliser les médicaments, les toxines et les virus.

Choix multiples

Pour de nombreuses utilisations en laboratoire, les anticorps polyclonaux fonctionnent bien, mais pour certains types de tests, ils n'ont pas suffisamment de ________ car ils réagissent de manière croisée avec des antigènes inappropriés.

1. spécificité
2. sensibilité
3. précision
4. réaction

Réponse

UN

Comment sont produits les anticorps monoclonaux ?

1. Des lymphocytes B producteurs d'anticorps provenant d'une souris sont fusionnés avec des cellules myélomateuses, puis les cellules sont cultivées en culture tissulaire.
2. On injecte un antigène à une souris, puis on prélève des anticorps dans son sérum.
3. Ils sont produits par le système immunitaire humain en réponse naturelle à une infection.
4. Ils sont produits par le système immunitaire de la souris en réponse naturelle à une infection.

Réponse

UN

Remplissez le champ vide

Lorsque nous injectons le même antigène à un animal une deuxième fois quelques semaines après la première, ________ a lieu, ce qui signifie que les anticorps produits après la deuxième injection se lient en moyenne plus étroitement à l'antigène.

Réponse

maturation par affinité

Lorsque vous utilisez des mAbs pour traiter des maladies chez l'homme, les mAbs doivent d'abord être ________ en remplaçant l'ADN à région constante de la souris par l'ADN à région constante humain.

Réponse

humanisé

Si nous utilisions des mAbs normaux de souris pour traiter une maladie humaine, des doses multiples provoqueraient une réponse du patient par ________ contre les anticorps de souris.

Réponse

anticorps neutralisants

Une réponse polyclonale à une infection se produit parce que la plupart des antigènes possèdent plusieurs ________,

Réponse

épitopes

Réponse courte

Décrivez deux raisons pour lesquelles les anticorps polyclonaux sont plus susceptibles de présenter une réactivité croisée que les anticorps monoclonaux.

Pensée critique

Supposons que vous recherchiez des produits dans une épicerie pour détecter la présence d'une contamination par E. coli. Serait-il préférable d'utiliser un antisérum polyclonal anti-E. coli ou un mAb contre une protéine membranaire d'E. coli ? Expliquez.

20.2 : Détection de complexes antigène-anticorps in vitro

Les tests de laboratoire visant à détecter les anticorps et les antigènes à l'extérieur du corps (par exemple, dans un tube à essai) sont appelés essais in vitro. Lorsque les anticorps et leurs antigènes correspondants sont présents dans une solution, nous pouvons souvent observer une réaction de précipitation au cours de laquelle de grands complexes (réseaux) se forment et se déposent hors de la solution.

Choix multiples

La formation de ________ est un résultat positif au test VDRL.

1. floculant
2. précipitine
3. coagulation
4. une couleur rose vif

Réponse

UN

Le titre d'un test de neutralisation du virus est la plus forte dilution du sérum du patient

1. dans lequel il n'y a pas d'ADN viral détectable.
2. dans lequel il n'existe aucune protéine virale détectable.
3. qui bloque complètement la formation de plaque.
4. qui réduit la formation de plaque d'au moins 50 %.

Réponse

D

Dans le test d'Ouchterlony, nous observons la formation d'un arc de précipitation prononcé entre l'antigène et l'antisérum. Pourquoi cet arc reste-t-il visible pendant longtemps ?

1. Les molécules d'anticorps sont trop grosses pour être diffusées à travers la gélose.
2. Le réseau de précipitine est trop grand pour être diffusé à travers la gélose.
3. Le méthanol, ajouté une fois l'arc formé, dénature la protéine et bloque la diffusion.
4. Les molécules d'antigène sont couplées chimiquement à la matrice du gel.

Réponse

B

Remplissez le champ vide

Lorsque l'on ajoute lentement de l'antigène à un antisérum, la quantité de precipitine augmente progressivement jusqu'à atteindre ________ ; l'ajout d'un autre antigène après ce point diminuerait en fait la quantité de précipitine.

Réponse

zone d'équivalence ou zone d'équivalence

Le test d'immunodiffusion radiale permet de quantifier l'antigène en mélangeant ________ dans un gel, puis en laissant l'antigène se diffuser à partir d'un puits creusé dans le gel.

Réponse

antisérum

Réponse courte

Expliquez pourquoi l'hémolyse lors du test de fixation du complément est un test négatif pour l'infection.

Que signifie le terme « anticorps neutralisants » et comment quantifier cet effet à l'aide du test de neutralisation virale ?

Pensée critique

Les anticorps IgM et IgG peuvent être utilisés dans les réactions de précipitation. Cependant, l'une de ces classes d'immunoglobulines formera des précipités à des concentrations beaucoup plus faibles que l'autre. De quelle classe s'agit-il et pourquoi est-elle tellement plus efficace à cet égard ?

20.3 : Essais d'agglutination

En plus de provoquer la précipitation des molécules solubles et la floculation des molécules en suspension, les anticorps peuvent également agglomérer des cellules ou des particules (par exemple, des billes de latex recouvertes d'antigène) dans le cadre d'un processus appelé agglutination. L'agglutination peut être utilisée comme indicateur de la présence d'anticorps dirigés contre des bactéries ou des globules rouges. Les tests d'agglutination sont généralement rapides et faciles à réaliser sur une lame de verre ou une plaque de microtitrage.

Choix multiples

Nous utilisons des antisérums pour distinguer les différents ________ au sein d'une même espèce de bactérie.

1. isotypes
2. sérovars
3. sous-espèce
4. lignes

Réponse

B

Lorsque nous utilisons des antisérums pour caractériser des bactéries, nous associons souvent les anticorps à ________ afin de mieux visualiser l'agglutination.

1. perles en latex
2. globules rouges
3. autres bactéries
4. globules blancs

Réponse

UN

Le test de dépistage des anticorps qui est effectué en même temps que le typage sanguin avant la transfusion est utilisé pour s'assurer que le receveur

1. ne présente pas d'infection bactérienne ou virale non détectée auparavant.
2. n'est pas immunodéprimé.
3. possède effectivement le groupe sanguin indiqué dans le tableau en ligne.
4. ne fabrique pas d'anticorps contre des antigènes extérieurs aux systèmes ABO ou Rh.

Réponse

D

Le test direct de Coombs est conçu pour détecter les personnes atteintes d'une maladie qui les amène à

1. avez une fièvre trop élevée.
2. arrête de fabriquer des anticorps.
3. fabrique trop de globules rouges.
4. produisent des anticorps qui se lient à leurs propres globules rouges.

Réponse

D

Les tests d'hémagglutination virale ne fonctionnent qu'avec certains types de virus pour les raisons suivantes :

1. le virus doit être capable de réticuler directement les globules rouges.
2. le virus doit être capable de lyser les globules rouges.
3. le virus ne doit pas être capable de lyser les globules rouges.
4. d'autres virus sont trop dangereux pour être manipulés dans un laboratoire clinique.

Réponse

UN

Remplissez le champ vide

Lors du principal match croisé, nous mélangeons ________ aux globules rouges du donneur et recherchons une agglutination.

Réponse

sérum pour patients

Le réactif de Coombs est un antisérum contenant des anticorps qui se lient au ________ humain.

Réponse

immunoglobulines/anticorps et/ou complément

Réponse courte

Expliquez pourquoi le titre d'un essai d'hémagglutination directe correspond à la dilution la plus élevée qui provoque toujours une hémagglutination, alors que dans le test d'inhibition de l'hémagglutination virale, le titre correspond à la dilution la plus élevée à laquelle aucune hémagglutination n'est observée.

Pourquoi un médecin prescrirait-il un test de Coombs direct lorsqu'un bébé naît avec la jaunisse ?

Pensée critique

En cas de pénurie de sang donné, du sang O négatif peut être administré aux patients, même s'ils ont un groupe sanguin différent. Pourquoi est-ce le cas ? Si les réserves de sang O négatif étaient épuisées, quel serait le meilleur choix pour un patient d'un groupe sanguin différent qui a un besoin critique de transfusion ? Expliquez vos réponses.

20.4 : Essais immuno-enzymatiques (EIA) et tests immunoenzymatiques (ELISA)

Les immunoessais enzymatiques (EIA) sont utilisés pour visualiser et quantifier les antigènes. Ils utilisent un anticorps conjugué à une enzyme pour se lier à l'antigène, et l'enzyme convertit un substrat en un produit final observable. Le substrat peut être un chromogène ou un fluorogène. L'immunocoloration est une technique d'EIA qui permet de visualiser les cellules d'un tissu (immunohistochimie) ou d'examiner les structures intracellulaires (immunocytochimie). L'ELISA directe est utilisée pour quantifier un antigène en solution.

Choix multiples

Dans un essai immunoenzymatique, l'enzyme

1. est lié par le site de liaison à l'antigène de l'anticorps.
2. est fixé au puits d'une plaque de microtitrage.
3. est conjugué à l'antigène suspect.
4. est lié à la région constante de l'anticorps secondaire.

Réponse

D

Lorsque nous utilisons un EIA pour étudier des microtubules ou d'autres structures à l'intérieur d'une cellule, nous fixons d'abord chimiquement la cellule, puis nous les traitons avec de l'alcool. Quel est l'objectif de ce traitement contre l'alcool ?

1. Il fait des trous dans la membrane cellulaire suffisamment grands pour permettre aux anticorps de passer.
2. Il rend la membrane collante afin que les anticorps se lient et soient absorbés par endocytose médiée par des récepteurs.
3. Il élimine les charges négatives de la membrane qui, sinon, repousseraient les anticorps.
4. Il empêche la liaison non spécifique des anticorps à la membrane cellulaire.

Réponse

UN

Lors d'un test de grossesse à flux latéral, vous voyez une forme de bande bleue sur la ligne de contrôle et aucune forme de bande sur la ligne de test. Il s'agit probablement d'un test ________ pour la grossesse.

1. positif
2. faux positif
3. faux négatif
4. négatif

Réponse

D

Lors de la réalisation d'une FEIA, le fluorogène remplace le ________ utilisé dans une EIE.

1. antigène
2. substrat chromogène
3. enzyme
4. anticorps secondaire

Réponse

B

Remplissez le champ vide

Pour détecter les anticorps dirigés contre les bactéries présentes dans le sang à l'aide d'une EIA, nous utiliserions un (n) ________, dans lequel nous commencerions par fixer l'antigène de la bactérie aux puits d'une plaque de microtitrage.

Réponse

ELISA indirect

Réponse courte

Pourquoi est-il important, dans un test ELISA en sandwich, que l'antigène possède plusieurs épitopes ? Et pourquoi serait-il avantageux d'utiliser des antisérums polyclonaux plutôt que du maB dans ce test ?

La bandelette de test de grossesse détecte la présence de gonadotrophine chorionique humaine dans les urines. Cette hormone est d'abord produite par le fœtus, puis par le placenta. Pourquoi la bandelette réactive est-elle préférée pour ce test plutôt que d'utiliser un test ELISA direct ou indirect avec des résultats plus quantifiables ?

Pensée critique

Étiquetez les anticorps primaires et secondaires et expliquez pourquoi la production du produit final sera proportionnelle à la quantité d'antigène.

20.5 : Techniques d'auto-anticorps fluorescents

La visualisation rapide des bactéries à partir d'un échantillon clinique, tel qu'un prélèvement de gorge ou des expectorations, peut être réalisée grâce à des techniques d'anticorps fluorescents (FA) qui fixent un marqueur fluorescent (fluorogène) à la région constante d'un anticorps, ce qui permet d'obtenir une molécule rapporteuse rapide à utiliser, facile à voir ou à mesurer, et capable de se lier à des marqueurs cibles avec une grande spécificité. Nous pouvons également étiqueter des cellules, ce qui nous permet de quantifier avec précision des sous-ensembles particuliers de cellules ou même de les purifier pour des recherches plus approfondies.

Choix multiples

Supposons que vous deviez quantifier le taux de lymphocytes T CD8 dans le sang d'un patient qui se remet d'une grippe. Vous traitez un échantillon de globules blancs du patient à l'aide d'un mAb fluorescent contre le CD8, vous faites passer les cellules dans un cytomètre en flux et vous produisez l'histogramme ci-dessous. La zone située sous le pic à gauche (bleu) est trois fois plus grande que la surface du pic à droite (rouge). Que pouvez-vous déterminer à partir de ces données ?

1. Il n'y a pas de cellules CD8 détectables.
2. Il y a trois fois plus de cellules CD4 que de cellules CD8.
3. Il y a trois fois plus de cellules CD8 que de cellules CD4.
4. Les cellules CD8 représentent environ un quart du nombre total de cellules.

Réponse

D

Dans les données décrites dans la question précédente, l'intensité moyenne de fluorescence des cellules du deuxième pic (rouge) est d'environ ________ celle du premier pic (bleu).

1. trois fois
2. 100 fois
3. un tiers
4. 1000 fois

Réponse

B

Lors d'un test d'anticorps fluorescents directs, lequel des éléments suivants rechercherons-nous le plus probablement à l'aide d'un mAb marqué par fluorescence ?

1. bactéries dans un échantillon prélevé sur un patient
2. bactéries isolées d'un patient et cultivées sur des plaques de gélose
3. antisérum d'un patient étalé sur une lame de verre
4. antisérum provenant d'un patient qui s'était lié à des billes recouvertes d'antigène

Réponse

UN

Remplissez le champ vide

En cytométrie en flux, des sous-ensembles cellulaires sont marqués à l'aide d'un anticorps fluorescent dirigé contre une protéine membranaire. Le fluorogène est activé par a (n) ________ lorsque les cellules passent devant les détecteurs.

Réponse

laser

La fluorescence dans un cytomètre en flux est mesurée par un détecteur placé à un angle par rapport à la source lumineuse. Il existe également un détecteur en ligne qui peut détecter les amas de cellules ou ________.

Réponse

fragments

Pensée critique

Un patient soupçonné d'être atteint de syphilis est testé à la fois à l'aide du test VDRL et de l'IFA. Le test IFA revient positif, mais le test VDRL est négatif. Quelle est la raison la plus probable de ces résultats ?

Un clinicien soupçonne qu'un patient atteint de pneumonie peut être infecté par Legionella pneumophila. Décrivez brièvement deux raisons pour lesquelles un test DFA pourrait être plus efficace pour détecter ce pathogène que les techniques bactériologiques standard.