8.1: ליזת תאים
- Page ID
- 207733
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)\(\newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)
מקור: BiochemFFA_8_1.pdf. ספר הלימוד כולו זמין בחינם מהמחברים בכתובת http://biochem.science.oregonstate.edu/content/biochemistry-free-and-easy
כדי להפריד תרכובות מסביבות סלולריות, ראשית יש לפרוץ (ליזה) את התאים. תאים נשברים פתוחים, בתמיסות שנאגרו, כדי להשיג ליזאט. ישנן מספר דרכים להשיג זאת.
- הלם אוסמוטי ואנזימים: אחת הדרכים לייז תאים היא על ידי הורדת החוזק היוני של המדיום בו נמצאים התאים. זה יכול לגרום לתאים להתנפח ולהתפוצץ. ניתן להשתמש בחומרים פעילי שטח קלים לשיבוש ממברנות. רוב החיידקים, השמרים ורקמות הצמח עמידים בפני זעזועים אוסמוטיים, בגלל נוכחות דפנות התא, ובדרך כלל נדרשות טכניקות הפרעה חזקות יותר. אנזימים עשויים להיות שימושיים בסיוע לפירוק דפנות התא. ליזוזים, למשל, שימושי מאוד לפירוק דפנות חיידקים. אנזימים אחרים הנפוצים כוללים תאית (צמחים), פרוטאזות, מנזות ואחרים.
- הפרעה מכנית: ניתן להשתמש בתסיסה מכנית בצורה של חרוזים המטלטלים בתערובת של תאים. בשיטה זו מופגזים תאים בחרוזי זכוכית זעירים ששוברים את התאים. Sonication (גלי קול 20-50 קילוהרץ) מספק סוג חלופי של תסיסה שיכולה להיות יעילה. השיטה רועשת, לעומת זאת, ומייצרת חום שיכול להיות בעייתי עבור תרכובות רגישות לחום.
- הפרעה בלחץ: אמצעי נוסף לשיבוש תאים כרוך בשימוש ב"פצצת תאים". בשיטה זו, התאים ממוקמים בלחץ גבוה מאוד (עד 25,000 psi) ואז הלחץ משתחרר במהירות. שינוי הלחץ המהיר גורם לשחרור גזים מומסים בתאים כבועות אשר, בתורן, פורצות תאים פתוחים.
- קריופולבריזציה: קריופולבריזציה משמשת לעתים קרובות לדגימות בעלות מטריצה חוץ-תאית קשוחה, כגון רקמת חיבור, זרעים וסחוס. בטכניקה זו, רקמות מוקפאות באמצעות חנקן נוזלי ואז מבוצעת ריסוק השפעה (בדרך כלל טחינה, באמצעות מרגמה ועלי או מטחנה חשמלית עוצמתית). האבקה המתקבלת כך מושעה אז במאגר המתאים.
לא משנה באיזו שיטה משתמשים ליצירת ליזאט, שברים גולמיים המתקבלים ממנו חייבים להיות מעובדים עוד יותר באמצעות חלוקה.