Skip to main content
Global

20.3: Uchunguzi wa agglutination

  • Page ID
    174881
  • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)\(\newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)

    Malengo ya kujifunza

    • Linganisha agglutination moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja
    • Kutambua matumizi mbalimbali ya hemagglutination katika ugonjwa wa ugonjwa
    • Eleza jinsi aina za damu zimedhamiriwa
    • Eleza hatua zinazotumiwa kuvuka damu zinazofanana na kutumiwa katika uhamisho

    Mbali na kusababisha precipitation ya molekuli mumunyifu na flocculation ya molekuli katika kusimamishwa, kingamwili pia unaweza clump pamoja seli au chembe (kwa mfano, antigen-coated mpira shanga) katika mchakato unaoitwa agglutination (Kielelezo 18.1.8). Agglutination inaweza kutumika kama kiashiria cha kuwepo kwa antibodies dhidi ya bakteria au seli nyekundu za damu. Vipimo vya agglutination kawaida ni haraka na rahisi kufanya kwenye slide ya kioo au sahani ya microtiter (Kielelezo\(\PageIndex{1}\)). Sahani za microtiter zina safu ya visima kushikilia kiasi kidogo cha vitendanishi na kuchunguza athari (kwa mfano, agglutination) ama kuibua au kutumia spectrophotometer maalum iliyoundwa. Visima vinakuja kwa ukubwa tofauti kwa vipimo vinavyohusisha kiasi tofauti cha reagents.

    Sahani ya plastiki kuhusu ukubwa wa mkono na visima katika gridi ya taifa. Juu inaitwa 1-12 na upande umeandikwa A-H.
    Kielelezo\(\PageIndex{1}\): Sahani za Microtiter hutumiwa kufanya athari nyingi wakati huo huo katika visima vingi. (mikopo: mabadiliko ya kazi na “Microrao” /Wikimedia)

    Kuunganishwa kwa Bakteria na Virusi

    Matumizi ya vipimo vya agglutination kutambua bakteria ya streptococcal yalianzishwa katika miaka ya 1920 na Rebecca Lancefieldakakaking kazi na wenzake A.R. Dochez na Oswald Avery. 1 Alitumia antibodies kutambua M protini, sababu ya virulence juu ya streptococci ambayo ni muhimu kwa uwezo wa bakteria kusababisha strep koo. Uzalishaji wa antibodies dhidi ya protini M ni muhimu katika kuimarisha majibu ya kinga dhidi ya bakteria.

    Lancefield alitumia antisera kuonyesha kwamba aina tofauti za aina hiyo ya streptococci zinaonyesha matoleo tofauti ya protini ya M, ambayo inaelezea kwa nini watoto wanaweza kushuka kwa koo la strep mara kwa mara. Lancefield iliweka streptococci ya beta-hemolytic katika makundi mengi kulingana na tofauti za antijeni katika polysaccharides maalum ya kikundi iko katika ukuta wa seli za bakteria. Matatizo huitwa serovars kwa sababu hutofautishwa kwa kutumia antisera. Kutambua serovars zilizopo katika kuzuka kwa ugonjwa ni muhimu kwa sababu baadhi ya serovars inaweza kusababisha ugonjwa mbaya zaidi kuliko wengine.

    Njia iliyoandaliwa na Lancefield ni mtihani wa moja kwa moja wa agglutination, kwani seli za bakteria wenyewe zinajitokeza. Mkakati sawa unatumiwa zaidi leo wakati wa kutambua serovars ya bakteria na virusi; hata hivyo, ili kuboresha taswira ya agglutination, antibodies inaweza kushikamana na shanga za mpira wa ajizi. Mbinu hii inaitwa moja kwa moja agglutination assay (au mpira fixation assay), kwa sababu agglutination ya shanga ni marker kwa antibody kisheria kwa baadhi antigen nyingine (Kielelezo\(\PageIndex{2}\)). Vipimo vya moja kwa moja vinaweza kutumika kuchunguza uwepo wa antibodies ama au antigens maalum.

    Picha ya visima 6. Vizuri 4 ina matangazo ya bluu. Visima vingine vyote vina rangi ya bluu wazi.
    Kielelezo\(\PageIndex{2}\): Antibodies dhidi serovars sita tofauti ya Kundi A strep walikuwa masharti ya shanga mpira. Kila moja ya maandalizi sita ya antibody yalichanganywa na bakteria pekee kutoka kwa mgonjwa. Clumps vidogo vinavyoonekana vizuri 4 ni dalili ya agglutination, ambayo haipo kutoka visima vingine vyote. Hii inaonyesha kwamba serovar inayohusishwa na vizuri 4 iko katika sampuli ya mgonjwa. (mikopo: mabadiliko ya kazi na Shirika la Marekani la Microbiolojia)

    Ili kutambua antibodies katika serum ya mgonjwa, antigen ya riba inaunganishwa na shanga za mpira. Unapochanganywa na serum ya mgonjwa, antibodies itafunga antigen, kuunganisha msalaba wa shanga za mpira na kusababisha shanga kuziba moja kwa moja; hii inaonyesha uwepo wa antibody (Kielelezo\(\PageIndex{3}\)). Mbinu hii hutumiwa mara nyingi wakati wa kutafuta antibodies za IgM, kwa sababu muundo wao hutoa kiwango cha juu cha kuunganisha msalaba. Mfano mmoja uliotumiwa sana wa jaribio hili ni mtihani wa sababu ya rheumatoid (RF) ili kuthibitisha utambuzi wa arthritis ya rheumatoid. RF ni, kwa kweli, kuwepo kwa antibodies za IgM ambazo hufunga kwa IgG ya mgonjwa mwenyewe. RF itakuwa agglutinate Igg-coated mpira shanga.

    Katika mtihani wa nyuma, antijeni za mumunyifu zinaweza kuonekana katika serum ya mgonjwa kwa kuunganisha antibodies maalum (kawaida MABs) kwenye shanga za mpira na kuchanganya tata hii na serum (Kielelezo\(\PageIndex{3}\)).

    Vipimo vya agglutination hutumika sana katika nchi zisizoendelea ambazo zinaweza kukosa vifaa vinavyofaa kwa ajili ya kulima bakteria. Kwa mfano, mtihani wa Widal, unaotumiwa kwa uchunguzi wa homa ya typhoid, hutafuta agglutination ya Salmonella enterica subspecies typhi katika sera ya mgonjwa. Mtihani wa Widal ni wa haraka, wa gharama nafuu, na muhimu kwa ufuatiliaji kiwango cha kuzuka; hata hivyo, si sahihi kama vipimo vinavyohusisha utamaduni wa bakteria. Uchunguzi wa Widal mara nyingi hutoa chanya cha uongo kwa wagonjwa wenye maambukizi ya awali na subspecies nyingine za Salmonella, pamoja na hasi za uongo kwa wagonjwa wenye hyperproteinemia au upungufu wa kinga.

    Aidha, vipimo agglutination ni mdogo na ukweli kwamba wagonjwa kwa ujumla si kuzalisha ngazi detectable ya antibody wakati wa wiki ya kwanza (au zaidi) ya maambukizi. Mgonjwa anasemekana kuwa amepata seroconversion wakati viwango vya antibody vinafikia kizingiti cha kugundua. Kwa kawaida, seroconversion inafanana na mwanzo wa ishara na dalili za ugonjwa. Hata hivyo, katika maambukizi ya VVU, kwa mfano, kwa ujumla inachukua wiki 3 kwa seroconversion itafanyika, na katika baadhi ya matukio, inaweza kuchukua muda mrefu.

    Sawa na mbinu za mtihani wa pete ya precipitin na vipimo vya plaque, ni kawaida kuandaa dilutions ya mara mbili ya serum ya mgonjwa na kuamua titer ya agglutinating antibody sasa. Tangu viwango vya antibody hubadilika baada ya muda katika majibu ya kinga ya msingi na ya sekondari, kwa kuangalia sampuli baada ya muda, mabadiliko katika titer antibody yanaweza kugunduliwa. Kwa mfano, kulinganisha titer wakati wa awamu ya papo hapo ya maambukizi dhidi ya titer kutoka awamu ya convalescent itafafanua kama maambukizi ni ya sasa au yamefanyika katika siku za nyuma. Inawezekana pia kufuatilia jinsi mfumo wa kinga ya mgonjwa unavyoitikia pathogen.

    (a) Mchoro wa mtihani mzuri wa agglutination kwa antibodies. Duru kubwa (shanga za mpira) zina miduara ndogo (antigens) juu ya uso wao. Antibodies ya IgM (6 Y maumbo yaliyounganishwa kwenye msingi wao) yanafungwa na antigens. B) Mchoro wa mtihani mzuri wa agglutination kwa antigens. Shanga za mpira zina antigens juu yao. Vidogo vidogo vya bluu (vimelea) vina miduara (antigens) juu ya uso wao. Antigens hufunga kwa antibodies.
    Kielelezo\(\PageIndex{3}\): (a) Latex shanga coated na antigen itakuwa agglutinate wakati mchanganyiko na serum mgonjwa kama serum ina antibodies IgM dhidi ya antigen. (b) Mpira shanga coated na antibodies itakuwa agglutinate wakati mchanganyiko na serum mgonjwa kama serum ina antijeni maalum kwa kingamwili.
    Unganisha na Kujifunza

    Tazama video hii ambayo inaonyesha athari za agglutination na shanga za mpira.

    Zoezi\(\PageIndex{1}\)

    1. Je, agglutination hutumiwa kutofautisha serovars kutoka kwa kila mmoja?
    2. Katika assay mpira bead mtihani kwa antibodies katika serum ya mgonjwa, na nini ni shanga coated?
    3. Nini kilichotokea wakati mgonjwa amepata seroconversion?

    Hemagglutination

    Kuunganishwa kwa seli nyekundu za damu huitwa hemagglutination. Jaribio moja la kawaida linalotumia hemagglutination ni mtihani wa moja kwa moja wa Coombs ', pia huitwa mtihani wa moja kwa moja wa globulini wa antihuman (DAT), ambao kwa ujumla hutafuta kingamwili zisizo na glutinating. Mtihani unaweza pia kuchunguza inayosaidia kwenye seli nyekundu za damu.

    Mtihani wa Coombs 'mara nyingi huajiriwa wakati mtoto mchanga ana homa ya manjano, njano ya ngozi inayosababishwa na viwango vya juu vya damu vya bilirubini, bidhaa ya kuvunjika kwa hemoglobin katika damu. Mtihani wa Coombs 'hutumiwa kuamua kama seli nyekundu za damu za mtoto zimefungwa na antibodies za mama. Kingamwili hizi ingekuwa kuamsha inayosaidia, na kusababisha lisisi ya seli nyekundu za damu na jaundi inayofuata. Hali nyingine ambazo zinaweza kusababisha vipimo chanya vya moja kwa moja vya Coombs 'ni pamoja na athari za uhamisho wa hemolytic, anemia ya hemolytic autoimmune, mononucleosis inayoambukiza (inayosababishwa na virusi vya Epstein-Barr), kaswende, na pneumonia ya Mycoplasma. Mtihani mzuri wa moja kwa moja wa Coombs unaweza pia kuonekana katika baadhi ya saratani na kama mmenyuko wa mzio kwa madawa mengine (kwa mfano, penicillin).

    Antibodies amefungwa kwa seli nyekundu za damu katika hali hizi ni mara nyingi IgG, na kwa sababu ya mwelekeo wa maeneo ya antijeni kisheria kwenye IgG na ukubwa wa kiasi kikubwa cha seli nyekundu za damu, hakuna uwezekano kwamba agglutination yoyote inayoonekana itatokea. Hata hivyo, kuwepo kwa IgG amefungwa kwa seli nyekundu za damu inaweza kuwa wanaona kwa kuongeza coombs 'reagent, antiserum zenye antibodies antihuman IgG (ambayo inaweza kuwa pamoja na kupambana na inayosaidia) (Kielelezo\(\PageIndex{4}\)). Reagent ya Coombs inaunganisha IgG iliyounganishwa na seli nyekundu za damu jirani na hivyo inakuza agglutination.

    Pia kuna mtihani wa moja kwa moja wa Coombs 'unaojulikana kama mtihani wa antiglobulin wa moja kwa moja (IAT). Hii skrini ya mtu binafsi kwa antibodies dhidi ya antijeni nyekundu za seli za damu (isipokuwa antijeni A na B) ambazo hazipatikani katika serum ya mgonjwa (Kielelezo\(\PageIndex{4}\)). IAT inaweza kutumika kwa screen wanawake wajawazito kwa antibodies ambayo inaweza kusababisha ugonjwa hemolytic ya mtoto mchanga. Inaweza pia kutumika kabla ya kutoa damu. Maelezo zaidi juu ya jinsi IAT inavyofanyika ni kujadiliwa hapa chini.

    A) Mchoro wa mtihani wa moja kwa moja wa Coomb. Sampuli ya damu kutoka kwa mgonjwa mwenye anemia ya hemolytic na antibodies zilizounganishwa na seli nyekundu za damu. Antibodies huvaa seli nyekundu za damu za mgonjwa. Matone machache ya reagent ya Coomb (yenye antibodies ya kupambana na binadamu) huchanganywa na sampuli ya damu ya mgonjwa. Mmenyuko wa agglutination (clumping) inaonekana baada ya kuunganisha msalaba wa antibodies. B) Mchoro wa mtihani wa moja kwa moja wa Coomb. Seramu ya mgonjwa iliyo na antibodies hutolewa. Damu ya wafadhili imeongezwa. Antibodies ya mgonjwa hufunga kwa seli nyekundu za damu za wafadhili. Matone machache ya reagent ya Coombs 'yanachanganywa na sampuli. Mmenyuko wa agglutination huzingatiwa.
    Kielelezo\(\PageIndex{4}\): Hatua katika vipimo vya moja kwa moja na vya moja kwa moja vya Coombs vinaonyeshwa katika mfano.

    Antibodies ambazo hufunga kwa seli nyekundu za damu sio sababu pekee ya hemagglutination. Virusi vingine pia hufunga kwenye seli nyekundu za damu, na kisheria hii inaweza kusababisha agglutination wakati virusi vinavyounganisha seli nyekundu za damu. Kwa mfano, virusi vya mafua zina aina mbili tofauti za spikes za virusi zinazoitwa neuraminidase (N) na hemagglutinin (H), mwisho ulioitwa kwa uwezo wake wa kuimarisha seli nyekundu za damu (tazama Virusi). Hivyo, tunaweza kutumia seli nyekundu za damu kuchunguza kuwepo kwa virusi vya mafua kwa majaribio ya moja kwa moja ya hemagglutination (HA), ambayo virusi husababisha agglutination inayoonekana ya seli nyekundu za damu. Virusi vya matumbo na rubella vinaweza pia kugunduliwa kwa kutumia HA.

    Mara nyingi, serial dilution virusi agglutination assay hutumiwa kupima titer au kukadiria kiasi cha virusi zinazozalishwa katika utamaduni wa seli au kwa ajili ya uzalishaji wa chanjo. Jina la virusi linaweza kuamua kutumia HA moja kwa moja kwa kufanya dilution ya serial ya sampuli iliyo na virusi, kuanzia na mkusanyiko mkubwa wa sampuli ambayo hupunguzwa katika mfululizo wa visima. Dilution ya juu inayozalisha agglutination inayoonekana ni titer. Uchunguzi huo unafanywa katika sahani ya microtiter na visima vya V- au pande zote. Katika uwepo wa virusi vya agglutinating, seli nyekundu za damu na virusi hukusanyika pamoja na kuzalisha kitanda kilichoenea juu ya chini ya kisima. Kutokuwepo kwa virusi, seli nyekundu za damu hupanda au sediment chini ya kisima na kuunda pellet mnene, ndiyo sababu visima vya gorofa-chini haziwezi kutumika (Kielelezo\(\PageIndex{5}\)).

    Mabadiliko ya mtihani wa HA yanaweza kutumika kuamua jina la antibodies ya antiviral. uwepo wa kingamwili hizi katika serum ya mgonjwa au katika maabara zinazozalishwa antiserum neutralize virusi na kuzuia kutoka agglutinating seli nyekundu, na kufanya hii virusi hemagglutination kukandamiza assay (HIA). Katika jaribio hili, serum ya mgonjwa imechanganywa na kiasi kikubwa cha virusi. Baada ya incubation fupi, kiasi kikubwa cha seli nyekundu za damu huongezwa na hemagglutination huzingatiwa. Jina la serum ya mgonjwa ni dilution ya juu ambayo inazuia agglutination (Kielelezo\(\PageIndex{6}\)).

    Picha ya nonagglutination inaonyesha mstari nyekundu. Mchoro unaonyesha kwamba bila virusi seli kutoka pellet compact chini ya kisima. Picha ya agglutination inaonyesha doa nyekundu na eneo la jirani la pink. Mchoro unaonyesha kwamba seli nyekundu za damu na virusi huunda kamba.
    Kielelezo\(\PageIndex{5}\): Kusimamishwa kwa virusi kunachanganywa na kiasi kikubwa cha seli nyekundu za damu. Hakuna agglutination ya seli nyekundu za damu inayoonekana wakati virusi haipo, na seli huunda pellet compact chini ya kisima. Katika uwepo wa virusi, aina ya kuenea kwa pink hupungua ndani ya kisima. (mikopo chini: mabadiliko ya kazi na American Society kwa Microbiology)
    Mchoro wa sahani vizuri. Lebo ya juu inasoma: Dilution. Safu zimeandikwa: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128. Nguzo zimeandikwa: Mfano A, titer = 128 (hii inazunguka nguzo 1 na 2). Mfano B, hakuna antibody neutralizing (spans nguzo 3 na 4). Mfano C, titer = 64 spans nguzo 5 na 6.). Nguzo 1 na 2 zina dots nyekundu katika safu zote lakini moja ya chini. Nguzo 3 na 4 hazina dots nyekundu. Nguzo 5 na 6 zina dots nyekundu katika safu zote lakini mbili za chini.
    Kielelezo\(\PageIndex{6}\): Katika HIA hii, serum iliyo na antibodies kwa influenzavirus ilipata dilutions ya mara mbili kwenye sahani ya microtiter. Siri nyekundu za damu ziliongezwa kwenye visima. Ugomvi ulifanyika tu katika visima hivyo ambapo antibodies walikuwa pia kuondokana na neutralize virusi. Mkusanyiko mkubwa zaidi ambapo agglutination hutokea ni titer ya antibodies katika serum ya mgonjwa. Katika kesi ya mtihani huu, Mfano A inaonyesha titer ya 128, na Mfano C inaonyesha titer ya 64. (mikopo: mabadiliko ya kazi na Evan Burkala)

    Zoezi\(\PageIndex{2}\)

    1. Je! Ni utaratibu gani ambao virusi hugunduliwa katika mtihani wa hemagglutination?
    2. Ambayo matokeo ya hemagglutination inatuambia titer ya virusi katika sampuli?

    Wanyama katika Maabara

    Mengi ya yale tunayoyajua leo kuhusu mfumo wa kinga ya binadamu yamejifunza kupitia utafiti uliofanywa kwa kutumia wanyama-kimsingi, mamali-kama mifano. Mbali na utafiti, mamalia pia hutumiwa kwa ajili ya uzalishaji wa kingamwili nyingi na vipengele vingine vya mfumo wa kinga vinavyohitajika kwa ajili ya immunodiagnostics. Chanjo, uchunguzi, matibabu, na dawa za kutafsiri kwa ujumla zimeandaliwa kupitia utafiti na mifano ya wanyama.

    Fikiria baadhi ya matumizi ya kawaida ya wanyama wa maabara kwa kuzalisha vipengele vya mfumo wa kinga. Nguruwe za Guinea hutumiwa kama chanzo cha kutimiza, na panya ni chanzo kikuu cha seli kwa ajili ya kutengeneza MABs. Mabs hizi zinaweza kutumika katika utafiti na kwa madhumuni ya matibabu. Antisera hufufuliwa katika spishi mbalimbali, zikiwemo farasi, kondoo, mbuzi, na sungura. Wakati wa kuzalisha antiserum, mnyama huwa injected angalau mara mbili, na adjuvants inaweza kutumika kuongeza majibu ya antibody. Wanyama wakubwa wanaotumiwa kutengeneza antisera watakuwa na damu kuvunwa mara kwa mara kwa muda mrefu, na madhara kidogo kwa wanyama, lakini hiyo si kawaida kwa sungura. Ingawa tunaweza kupata mililita chache za damu kutoka kwenye mishipa ya sikio la sungura, kwa kawaida tunahitaji kiasi kikubwa, ambacho husababisha vifo vya wanyama.

    Pia tunatumia wanyama kwa ajili ya kujifunza magonjwa. Njia pekee ya kukua Treponema pallidum kwa ajili ya utafiti wa kaswisi ni katika wanyama hai. Virusi vingi vinaweza kukua katika utamaduni wa seli, lakini ukuaji katika utamaduni wa seli hutuambia kidogo sana kuhusu jinsi mfumo wa kinga utakavyoitikia virusi. Tunapofanya kazi kwenye ugonjwa mpya uliogunduliwa, bado tunaajiri postulates za Koch, ambazo zinahitaji kusababisha magonjwa katika wanyama wa maabara kwa kutumia vimelea kutoka utamaduni safi kama hatua muhimu katika kuthibitisha kwamba microorganism fulani ni sababu ya ugonjwa. Kujifunza kuenea kwa bakteria na virusi katika majeshi ya wanyama, na jinsi mfumo wa kinga ya mwenyeji unavyojibu, umekuwa muhimu kwa utafiti wa microbiological kwa zaidi ya miaka 100.

    Wakati mazoezi ya kutumia wanyama wa maabara ni muhimu kwa utafiti wa kisayansi na uchunguzi wa matibabu, watu wengi wanakataa sana unyonyaji wa wanyama kwa manufaa ya kibinadamu. Hoja hii ya kimaadili sio mpya-kwa kweli, mmoja wa binti wa Charles Darwin alikuwa mpiganaji wa kupambana na vivisectionist (vivisection ni mazoezi ya kukata au kusambaza mnyama hai ili kujifunza). Wanasayansi wengi wanakiri kwamba kuna lazima iwe na mipaka juu ya kiwango ambacho wanyama wanaweza kutumiwa kwa madhumuni ya utafiti. Mazingatio ya kimaadili yamesababisha Taasisi za Taifa za Afya (NIH) kuendeleza kanuni kali juu ya aina za utafiti ambazo zinaweza kufanywa. Kanuni hizi pia zinajumuisha miongozo ya matibabu ya kibinadamu ya wanyama wa maabara, kuweka viwango kwa ajili ya makazi yao, huduma, na euthanization. Hati ya NIH “Mwongozo wa Huduma na Matumizi ya Wanyama wa Maabara” inaonyesha wazi kuwa matumizi ya wanyama katika utafiti ni fursa iliyotolewa na jamii kwa watafiti.

    Miongozo ya NIH inategemea kanuni ya R tatu: kuchukua nafasi, kuboresha, na kupunguza. Watafiti wanapaswa kujitahidi kuchukua nafasi ya mifano ya wanyama na mifano isiyo ya kuishi, kuchukua nafasi ya vimelea na uti wa mgongo wakati wowote iwezekanavyo, au kutumia mifano ya kompyuta inapotumika. Wanapaswa kuboresha ufugaji na taratibu za majaribio ili kupunguza maumivu na mateso, na kutumia miundo ya majaribio na taratibu zinazopunguza idadi ya wanyama zinazohitajika ili kupata taarifa zinazohitajika. Ili kupata fedha, watafiti wanapaswa kukidhi wakaguzi wa NIH kwamba utafiti unahalalisha matumizi ya wanyama na kwamba matumizi yao ni kwa mujibu wa miongozo.

    Katika ngazi ya ndani, kituo chochote kinachotumia wanyama na kupokea fedha za shirikisho lazima iwe na Kamati ya Taasisi ya Huduma na Matumizi ya Wanyama (IACUC) inayohakikisha kwamba miongozo ya NIH inafuatiwa. IACUC lazima iwe pamoja na watafiti, watendaji, mifugo, na angalau mtu mmoja asiye na uhusiano na taasisi, yaani, raia anayehusika. Kamati hii pia hufanya ukaguzi wa maabara na itifaki. Kwa ajili ya utafiti unaohusisha masomo ya binadamu, Bodi ya Mapitio ya Taasisi (IRB) inahakikisha kwamba miongozo sahihi inafuatiwa.

    Unganisha na Kujifunza

    Tembelea tovuti hii ili uone Mwongozo wa NIH wa Huduma na Matumizi ya Wanyama wa Maabara.

    Kuandika damu na Kufanana na Msalaba

    Mbali na antibodies dhidi ya bakteria na virusi ambazo hapo awali zimefunuliwa, watu wengi pia hubeba antibodies dhidi ya aina za damu isipokuwa wao wenyewe. Kwa sasa kuna mifumo 33 immunologically muhimu damu aina, wengi ambao ni vikwazo ndani ya makundi mbalimbali ya kikabila au mara chache kusababisha uzalishaji wa kingamwili. Muhimu zaidi na labda inayojulikana zaidi ni makundi ya damu ya ABO na Rh (angalia Mchoro 19.1.3).

    Wakati vitengo vya damu vinachukuliwa kwa ajili ya kuongezewa damu, kupima damu kabla ya kupitishwa lazima kufanyike. Kwa kitengo cha damu, antibodies zilizoandaliwa kibiashara dhidi ya antijeni za A, B, na Rh huchanganywa na seli nyekundu za damu kutoka vitengo ili awali kuthibitisha kwamba aina ya damu kwenye kitengo ni sahihi. Mara baada ya kitengo cha damu imekuwa ombi kwa ajili ya kuongezewa damu, ni muhimu kuhakikisha wafadhili (kitengo cha damu) na mpokeaji (mgonjwa) ni sambamba kwa antijeni hizi muhimu. Mbali na kuthibitisha aina ya damu ya kitengo, aina ya damu ya mgonjwa pia imethibitishwa kwa kutumia antibodies sawa iliyoandaliwa kibiashara kwa A, B, na Rh. Kwa mfano, kama inavyoonekana katika Kielelezo\(\PageIndex{7}\), ikiwa damu ya wafadhili ni A-chanya, itagglutinate na antiserum ya kupambana na A na kupambana na RH. Ikiwa hakuna agglutination inazingatiwa na sera yoyote, basi aina ya damu itakuwa O-hasi.

    Kufuatia uamuzi wa aina ya damu, mara moja kabla ya kutolewa kwa damu kwa ajili ya kuongezewa damu, mechi ya msalaba hufanyika ambapo aliquot ndogo ya seli nyekundu za damu za wafadhili huchanganywa na seramu kutoka kwa mgonjwa anayesubiri kuongezewa damu. Ikiwa mgonjwa ana antibodies dhidi ya seli nyekundu za damu za wafadhili, hemagglutination itatokea. Ili kuthibitisha matokeo yoyote ya mtihani hasi na kuangalia kwa seli nyekundu za damu zilizohamasishwa, reagent ya Coombs inaweza kuongezwa kwenye mchanganyiko ili kuwezesha taswira ya mwingiliano wa seli nyekundu za damu.

    Chini ya hali fulani, mechi ndogo ya msalaba inaweza kufanywa pia. Katika jaribio hili, aliquot ndogo ya seramu ya wafadhili huchanganywa na seli nyekundu za damu za mgonjwa. Hii inaruhusu kugundua antibodies agglutinizing katika serum wafadhili. Jaribio hili ni mara chache muhimu kwa sababu kuongezewa kwa ujumla hutumia seli nyekundu za damu zilizojaa na sehemu nyingi za plasma zilizoondolewa na centrifugation.

    Seli nyekundu za damu zina antijeni nyingine nyingi pamoja na ABO na Rh. Wakati watu wengi hawana uwezekano wa kuwa na kingamwili dhidi ya antigens hizi, wanawake ambao wamekuwa na mimba nyingi au wagonjwa ambao wamekuwa na uhamisho nyingi wanaweza kuwa nazo kwa sababu ya kufidhiwa mara kwa mara. Kwa sababu hii, mtihani wa skrini ya antibody hutumiwa kuamua kama antibodies vile zipo. Serum mgonjwa ni checked dhidi ya kibiashara tayari, pamoja, aina O seli nyekundu za damu kwamba kueleza antijeni hizi. Ikiwa agglutination hutokea, antigen ambayo mgonjwa anajibu inapaswa kutambuliwa na kuamua kutokuwepo katika kitengo cha wafadhili.

    Tatu visima vizuri kwanza (kinachoitwa Anti-A) inaonyesha matangazo nyeusi na kinachoitwa clumping. Hii ni kutokana na RBC zilizoingizwa. Kisima cha pili (kinachoitwa Anti-B) kinaonekana laini na hakina clumping. Ya tatu vizuri (kinachoitwa) Anti-RH inaonyesha clumping kwa sababu ina matangazo.
    Kielelezo\(\PageIndex{7}\): Sampuli hii ya kadi ya “kitanda” inayozalishwa kibiashara inawezesha kuandika haraka ya damu ya mpokeaji na wafadhili kabla ya kuongezewa damu. Kadi ina maeneo matatu ya majibu au visima. Moja amefunikwa na antibody ya kupambana na A, moja yenye antibody ya kupambana na B, na moja yenye antibody ya kupambana na RH. Kuunganishwa kwa seli nyekundu za damu kwenye tovuti iliyotolewa inaonyesha utambulisho mzuri wa antigens za damu: katika kesi hii, antigens A na Rh kwa aina ya damu A-chanya.

    Zoezi\(\PageIndex{3}\)

    1. Ikiwa damu ya mgonjwa inakabiliwa na serum ya kupambana na B, ni aina gani ya damu ya mgonjwa?
    2. Upimaji wa mechi ya msalaba ni nini, na kwa nini unafanywa?

    \(\PageIndex{1}\)Jedwali linafupisha aina mbalimbali za majaribio ya agglutination yaliyojadiliwa katika sehemu hii.

    Jedwali\(\PageIndex{1}\): Utaratibu wa Chagua vipimo vya Antibody-Antigen
    Aina ya Uchunguzi Mfumo Mfano
    Kuunganisha Moja kwa moja: Antibody hutumiwa kupiga seli za bakteria au miundo mingine mikubwa Bakteria ya serotyping
    Moja kwa moja: Shanga za mpira zinajumuishwa na antigen au antibody kutafuta antibody au antigen, kwa mtiririko huo, katika serum ya mgonjwa Kuthibitisha uwepo wa sababu ya rheumatoid (IgM-kisheria Ig) katika serum ya mgonjwa
    Hemagglutination Moja kwa moja: Baadhi ya bakteria na virusi vya kuvuka huunganisha seli nyekundu za damu na kuzipiga pamoja Kugundua mafua, matumbwitumbwi, na surua
    Mtihani wa moja kwa moja wa Coombs '(DAT): Hutambua antibodies nonagglutinating au inayosaidia protini kwenye seli nyekundu za damu katika vivo Kuangalia antibodies ya uzazi inayofunga kwa seli nyekundu za damu za neonatal
    Uchunguzi wa moja kwa moja wa Coombs '(IAT): Skrini mtu binafsi kwa antibodies dhidi ya antijeni nyekundu za seli za damu (isipokuwa antijeni A na B) ambazo hazipatikani katika serum ya mgonjwa katika vitro Kufanya upimaji wa damu kabla ya kupitishwa
    Uzuiaji wa hemagglutination ya virusi: Inatumia antibodies kutoka kwa mgonjwa kuzuia agglutination ya virusi Kutambua magonjwa mbalimbali ya virusi kwa kuwepo kwa antibodies ya mgonjwa dhidi ya virusi
    Kuandika damu na kuvuka vinavyolingana: Hutambua ABO, Rh, na antigens madogo katika damu Inafanana na damu ya wafadhili na mahitaji ya kinga ya

    Dhana muhimu na Muhtasari

    • Antibodies inaweza agglutinate seli au chembe kubwa katika tumbo inayoonekana. Vipimo vya agglutination mara nyingi hufanyika kwenye kadi au kwenye sahani za microtiter ambazo zinaruhusu athari nyingi kutokea kwa upande kwa upande kwa kutumia kiasi kidogo cha vitendanishi.
    • Kutumia antisera dhidi ya protini fulani inaruhusu utambulisho wa serovars ndani ya spishi za bakteria.
    • Kuchunguza antibodies dhidi ya pathogen inaweza kuwa chombo chenye nguvu cha kugundua magonjwa, lakini kuna kipindi cha muda kabla ya wagonjwa kupitia seroconversion na kiwango cha antibodies inakuwa detectable.
    • Kuunganishwa kwa shanga za mpira katika majaribio ya moja kwa moja ya agglutination inaweza kutumika kuchunguza kuwepo kwa antigens maalum au antibodies maalum katika serum ya mgonjwa.
    • Kuwepo kwa baadhi ya antibodies ya antibacterial na antiviral inaweza kuthibitishwa na matumizi ya mtihani wa moja kwa moja wa Coombs ', ambao hutumia reagent ya Coombs kwa kuvuka kingamwili zinazounganishwa na seli nyekundu za damu na kuwezesha hemagglutination.
    • Baadhi ya virusi na bakteria zitamfunga na kuziba seli nyekundu za damu; mwingiliano huu ni msingi wa mtihani wa moja kwa moja wa hemagglutination, mara nyingi hutumiwa kuamua titer ya virusi katika suluhisho.
    • Vipimo vya neutralization kupima kiwango cha antibody maalum ya virusi kwa kupima kupungua kwa hemagglutination aliona baada ya kuchanganya serum ya mgonjwa na kiasi sanifu cha virusi.
    • Vipimo vya hemagglutination pia hutumiwa kuchunguza na kuvuka mechi ya wafadhili na damu ya mpokeaji ili kuhakikisha kwamba mpokeaji wa uhamisho hana kingamwili kwa antijeni katika damu iliyotolewa.

    maelezo ya chini

    1. 1 Lancefield, Rebecca C., “Antigenic Complex ya Streptococcus haemoliticus. I. maonyesho ya aina maalum Dutu katika Extracts ya Streptococcus haemolyticus,” Journal ya Madawa ya majaribio 47, № 1 (1928): 91-103.